Ciplox Gouttes Auriculaires 72

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L'activité antimicrobienne de Terminalia arjuna Wight Arn. Une plante ethnomédicales contre les agents pathogènes causant l'infection de l'oreille Kamal Rai Aneja a Chetan Sharma, b. Radhika Joshi c un Dr (Professeur) scholar b de recherche (Kurukshetra) c recherche universitaire disponible en ligne le 20 Octobre 2015. Résumé de l'infection de l'oreille est l'une des maladies courantes qui se produisent dans le monde entier. Différents agents étiologiques sont responsables d'infections de l'oreille. But évaluer le potentiel antimicrobien de Terminalia feuilles de Arjuna et des extraits d'écorce contre Staphylococcus aureus. Acinetobacter sp. . Proteus mirabilis . Escherchia coli. Pseudomonas aeruginosa et Candida albicans. les agents pathogènes provoquant des infections de l'oreille et leur comparaison avec localement disponibles gouttes auriculaires. Matériaux et procédés Methanol, l'éthanol, l'acétone, aqueuse (chaud et froid) des extraits des feuilles et de l'écorce de T. arjuna ont été testés pour leur activité antimicrobienne. Les résultats des trois solvants organiques évalués, extrait de feuilles acétonique a été trouvé pour être le meilleur contre S. aureus. L'extrait d'écorce organique a montré une inhibition presque égale de toutes les bactéries Gram négatif testées sauf P. aeruginosa. Cependant, extrait aqueux de T. écorce de arjuna présentait une bonne activité contre S. aureus. Tous les extraits ont été incapables de présenter une activité antifongique. Conclusion extrait organique obtenu à partir de l'écorce de T. arjuna et les feuilles peuvent être utilisées pour traiter les agents pathogènes bactériens d'oreille en particulier S. aureus. qui a montré une plus grande zones d'inhibition que les gouttes à base de plantes, cependant, nous avons encore besoin d'études plus détaillées que les tests in vivo et les propriétés pharmacocinétiques de leur utilité thérapeutique dans le traitement des infections de l'oreille. Mots-clés antimicrobien activité infection de l'oreille extrait de plante pathogène INTRODUCTION auriculaire est plus fréquente chez les enfants que les adultes, environ 75 d'expérience des enfants au moins trois ou plusieurs infections de l'oreille au cours des trois premières années de vie 1. Infection de l'oreille est principalement causée par des bactéries (Pseudomonas aeruginosa, staphylococcus aureus, S. epidermidis, Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli, Proteus mirabilis) et les pathogènes fongiques (Aspergillus niger, A. fumigatus, A. flavus, Candida albicans) 2. 3. 4 et 5. L'efficacité clinique de nombreux agents chimiothérapeutiques existants est menacée par l'émergence de pathogènes multirésistants. Les bactéries se développent naturellement la résistance aux médicaments antimicrobiens. Au cours des dernières années, cependant, l'utilisation excessive et abusive d'antibiotiques a causé un nombre croissant de bactéries de staphylocoque à évoluer vers la maladie causant superbactéries résistantes aux médicaments tels que la méthicilline, la vancomycine 6. 7 et 8. L'échec croissant de chimiothérapeutiques et la résistance aux antibiotiques présentée par pathogène agents infectieux microbiens a conduit à la projection de plusieurs usines pour leur activité antimicrobienne potentiel et le développement de nouveaux antimicrobiens par les compagnies pharmaceutiques 7 et 9. les herbes sont la mise en scène un retour et la renaissance à base de plantes qui se passe partout dans le monde et selon l'OMS, 80 du population mondiale repose sur les médicaments traditionnels à base de plantes pour leurs soins de santé primaires a besoin 10. 11 et 12. La nature a donné l'Inde avec une flore riche qui est largement distribué. Les plantes médicinales ont été utilisés pour le traitement et la guérison de diverses maladies dans les méthodes pratiquées traditionnels indiens tels que l'Ayurveda, Unani et Siddha 13 et 14. Terminalia arjuna Wight Arn. communément appelés arjuna (famille Combretaceae), est un arbre à feuilles caduques et à feuilles persistantes distribué dans toute l'Inde et a également constaté en Birmanie, Srilanka et Maurice, de plus en plus jusqu'à une hauteur de 60 à 90 pieds. Feuilles de arjuna sont simples, oblongues ou elliptiques avec surface supérieure vert pâle et sombre et pâle surface inférieure brun. Les fleurs sont bisexuelles, sessiles et blanc disposées en pointes courtes axillaires ou pannicule terminal. L'écorce est lisse, gris-rose de l'extérieur et se écaille dans les grandes, courbes et plutôt plates pièces 15 et 16. L'écorce et les feuilles de cette plante ont été utilisées dans le système indigène de la médecine pour guérir différentes maladies, l'écorce dans le traitement pour l'angine de poitrine (hritshool), expectorant, antidysentric, purgatif, laxatif, leucoderme, l'anémie, l'hyperhidrose, asthama, des tumeurs et d'autres troubles cardiovasculaires 16 et 17 et les feuilles comme un remède pour le traitement des maux d'oreille 18. l'écorce possède également une bonne anticancéreuse, activités antivirales et antimicrobiennes 19 et 20. Les plantes ont la capacité illimitée de synthétiser des métabolites secondaires tels que les tanins, les terpènes, alcaloïdes, flavonoïdes, des glycosides et des phénols qui ont été trouvés pour avoir des propriétés antimicrobiennes 11. 21 et 22. Les feuilles et l'écorce de T. arjuna contiennent glycosides ayant un effet protecteur cardio, flavanoïdes ayant un antioxydant, anti-inflammatoire, antimicrobiens (lutéoline), des effets anti-cancéreux et hypolipidémiants, les tanins responsables de l'astringent, la cicatrisation des plaies, antioxydant, anti-cancer, une activité anti - virale et antimicrobiens. En plus de ces phytocomposants écorce contient également des triterpénoïdes responsables principalement pour (acide arjunique, arjungenin et arjunetin) cardio protecteur et antibactérien effet 15. 16 et 23. Une grande variété de plantes médicinales utilisées traditionnellement n'a pas encore été étudié de façon systématique contre divers agents pathogènes microbiens 24. Recherche documentaire révèle la réalisation de quelques études sur l'activité antibactérienne et antifongique de diverses parties de cette plante, comme l'écorce 23. 25 et 26. feuilles, racines et fruits 15. 27 et 28. Cependant, des études antimicrobiennes contre les agents pathogènes de l'infection de l'oreille font défaut. La présente étude a été réalisée afin de valider le potentiel antimicrobien de feuilles de T. arjuna et de l'écorce contre les oreilles pathogènes bactériens et fongiques isolées des patients locaux de Kurukshetra et leur comparaison avec disponibles localement gouttes auriculaires en vue de la recherche d'un nouvel extrait en tant que remède pour traiter les infections de l'oreille. Matériel et méthodes de collecte des plantes L'écorce et les feuilles de Terminalia arjuna ont été recueillies à partir des arbres le long des routes de l'Université de Kurukshetra, Haryana. L'identité taxonomique de cette plante a été confirmé par le Dr B. D. Vashishta du Département de botanique, Université Kurukshetra, Kurukshetra. Extraction du matériel végétal Les échantillons ont été soigneusement lavés sous l'eau courante du robinet puis de l'eau distillée stérile et séché à l'air à la température ambiante (40C) pendant 4-5 jours, puis homogénéisé à une poudre fine en utilisant un broyeur mélangeur stérilisé et stocké dans l'air des bouteilles serrées . Quatre solvants différents à savoir l'éthanol, le méthanol, l'acétone et aqueuse (chaud et froid) ont été utilisés pour l'extraction. Une quantité de 10 g d'écorce homogénéisé et les feuilles étaient trempés séparément dans des flacons coniques chaque containing100 ml d'acétone, l'éthanol, le méthanol (95) et de l'eau distillée stérile. De plus, le même montant (soit 10 g) de l'écorce homogénéisé et les feuilles ont été immergés séparément dans 100 ml d'eau distillée stérile chaude dans des flacons coniques et on laisse reposer pendant 30 min au bain-marie avec de temps en temps un tremblement suivi en gardant tous les flacons sur un agitateur rotatif à 200 tpm pendant 24 h 29. 30 et 31. Chaque préparation a été filtré à travers un papier Whatman n ° 1 du papier filtre stérilisé et enfin concentrée à sec sous vide à 40 ° C en utilisant rotaevaporator. L'extrait sec ainsi obtenu a été stérilisé par irradiation UV pendant une nuit et contrôlé pour la stérilité sur des plaques d'agar nutritif et on stocke à 4 ° C dans des flacons stériles jusqu'à utilisation ultérieure marquées 14 et 32. micro-organismes d'essai Cinq bactéries à savoir Staphylococcus aureus (HM626197) (Gram-positif), Acinetobacter sp. (HM626198), Proteus mirabilis (HM626199), Escherchia coli (HM626200), Pseudomonas aeruginosa (HM626201) (Gram négatif) et une levure, Candida albicans utilisés dans cette étude, ont été isolés à partir des patients ayant une infection de l'oreille dans les cliniques ORL locales de Kurukshetra. Les souches bactériennes ont été identifiées sur la base de la coloration, biochimiques et les caractéristiques moléculaires (16S de séquençage de l'ARNr) 33 et de la levure sur la base de la coloration, la morphologie et les caractéristiques culturelles 5. 34 et 35. Les isolats bactériens ont été repiqués sur gélose nutritive et de la levure pour le malt agar de levure et incubé en aérobiose à 37 o C. Les médias ont été achetés auprès de Salut media Laboratory Pvt. Ltd Bombay, en Inde. Gouttes auriculaires Trois oreille couramment prescrit gouttes par otolaryngologist, deux allopathique Ciplox (antibactérien), Candid (antifongique), et une baisse de l'oreille à base de plantes Bilwa Tel (antimicrobien), utilisé dans cette étude, ont été achetés sur le marché local de Kurukshetra. Criblage pour une activité antimicrobienne L'acétone, le méthanol, l'éthanol chaud et froid aqueux des feuilles de T. arjuna et des extraits d'écorce ont été utilisées pour l'évaluation de l'activité anti-microbienne par la méthode de diffusion en puits de gélose 36 et 37. Dans ce procédé, isolat pur de chaque microbe était repiquées sur les plaques de milieu gélose à 37 0 C pendant 24 h. Une plaque de chaque micro-organisme a été prélevé et un minimum de quatre colonies ont été touché avec une boucle stérile et transféré dans une solution saline normale (0,85) dans des conditions aseptiques. Densité de chaque suspension microbienne a été ajustée égale à celle de 10 6 ufc / ml (normalisé par 0.5McFarland standard) et utilisés comme inoculum pour la réalisation d'agar test de diffusion de puits. Une centaine de microlitres (100L) de l'inoculum de chaque organisme d'essai a été étalée sur des plaques d'agar de manière à parvenir à une croissance confluente. Les plaques de gélose ont été mises à sécher et les puits de 8 mm ont été réalisés avec un perce stérile dans les plaques d'agar inoculées et la partie inférieure de chaque puits a été scellé avec un peu de milieu gélose fondu spécifique. Les extraits séchés ont été reconstitués dans 20 du diméthylsulfoxyde (DMSO) pour l'analyse d'essai biologique 38. Un volume de 100 ul de chaque extrait a été propulsé directement dans les puits (en triple exemplaire) des plaques d'agar inoculées pour chaque organisme d'essai. Les plaques ont été laissées au repos pendant 1 heure pour la diffusion de l'extrait dans la gélose et incubées à 37 ° C pendant 24 h. 32 et 39. Stérile DMSO (20) a servi de témoin négatif et Ciplox (pour les bactéries), franche (pour les champignons) et Bilwa tel (antimicrobien) gouttes auriculaires servi de contrôle positif. L'activité antimicrobienne, indiquée par une zone d'inhibition entourant le puits contenant l'extrait, a été enregistrée, si la zone d'inhibition était supérieure à 8 mm 40. Les expériences ont été réalisées en triple et les valeurs moyennes du diamètre des zones d'inhibition avec un écart-type ont été calculés . Détermination de la concentration inhibitrice (CMI) MIC minimum pour chaque organisme d'essai a été déterminée en suivant la méthode de diffusion de puits d'agar modifié. Une dilution double en série de chaque extrait a été préparé en premier reconstituant l'extrait séché (100 mg / ml) dans 20 du DMSO suivi par une dilution dans de l'eau distillée stérile (1: 1) pour obtenir une plage de concentration décroissant de 50 mg / ml à 0.39mg / ml. A 100 l de volume de chaque dilution a été introduit dans les puits (en triple exemplaire) dans les plaques d'agar déjà ensemencés avec 100l d'inoculum standardisé (10 6 ufc / ml) de la souche microbienne du test. Toutes les plaques d'essai ont été mises en incubation en aérobiose à 37 ° C pendant 24 heures et on a observé des zones d'inhibition. MIC, pris comme la plus faible concentration de l'extrait de test qui a complètement inhibé la croissance du microbe, montré par une zone claire d'inhibition (8mm), a été enregistrée pour chaque organisme d'essai 32. 37. 41 et 42. Analyse statistique Toutes les données ont été présentées sous forme de moyenne SD (écart-type). Les résultats ont été statistiquement évaluées en utilisant Dennetts T-test. P valeur inférieure à 0,01 ont été considérées comme significatives. RESULTATS L'activité antibactérienne de T. écorce de arjuna et laisse des extraits sur les plaques d'agar variées dans différents solvants. Des dix extraits criblés pour une activité antifongique, aucun de l'extrait a montré la production de la zone d'inhibition contre Candida albicans ne permettent donc pas une activité antifongique. Les contrôles positifs produits des zones d'inhibition de taille significative contre les bactéries testées et la levure, cependant, le contrôle négatif produit aucun effet inhibiteur observable contre l'un de l'organisme d'essai (tableau 1). Tableau 1. L'activité antimicrobienne de Terminalia feuilles de Arjuna et l'extrait d'écorce sur les agents pathogènes de l'oreille déterminée par agar méthode de diffusion de puits. Aucune activité, nt pas été testé. Les valeurs, y compris le diamètre du puits (8mm), sont des moyens de trois répétitions écart-type. Les données ont été analysées par une ANOVA suivie par le test t Dunnetts. p 0,01 par rapport au contrôle positif. Un examen des données du tableau 1 révèle que tous les six extraits des deux feuilles et de l'écorce de solvants organiques possèdent une activité antibactérienne contre les quatre agents pathogènes bactériens, des cinq agents pathogènes testés. L'extrait de feuilles acétonique a été trouvé être le plus efficace contre le Staphylococcus aureus (28 mm) (figure 1), suivie par Proteus mirabilis (27.6mm), (la 16.6mm) de Acinetobacter et Pseudomonas aeruginosa (16 mm). Les zones de inhibiton produites par les méthanoliques et éthanoliques extraits contre S. aureus et P. mirabilis se situaient entre 24.6mm et 26,3 mm. S. aureus et de P. mirabilis se sont révélés être des agents pathogènes les plus sensibles qui ont survécu jusqu'à 1,56 mg / ml et 3,12 mg / ml (tableau 2), présentant ainsi une CMI de 3,12 mg / ml et 6,25 mg / ml, respectivement. La zone d'inhibition produite par les extraits de feuilles organiques contre P. aeruginosa et Acitenobacter sp. varié entre 15mm et 16.6mm. P. aeruginosa et Acitenobacter sp. se sont révélés être relativement moins sensible car ils ont survécu jusqu'à 25 mg / ml (extraits éthanoliques et méthanoliques) et 12,5 mg / ml (extrait acétonique) ayant ainsi une CMI de 50 mg / ml et 25 mg / ml, respectivement. Aucune activité antibactérienne a été observée dans des extraits aqueux et organiques feuilles contre E. coli. Figure 1. Zone d'inhibition antibactérienne de T. arjuna laisse extraits organiques contre S. aureus par acétonique (A), méthanolique (B), extrait éthanolique (C), et DMSO témoin négatif (D). Tableau 2. MIC de Terminalia feuilles de Arjuna et l'extrait d'écorce sur les agents pathogènes de l'oreille déterminée par la méthode de diffusion de puits de gélose modifiée. Parmi les extraits d'écorce testés, tous les cinq extraits de solvant (organique et aqueuse) ont montré une activité antibactérienne contre Staphylococcus aureus avec la plus grande zone d'inhibition dans l'extrait aqueux chaud (27.6mm), suivie d'un extrait aqueux froid (26,3 mm) (figure 2), extrait d'éthanol (26mm), le méthanol et des extraits d'acétone (23mm). S. aureus a été à nouveau trouvé que l'agent pathogène le plus sensible qui a survécu jusqu'à la concentration la plus faible ie0.78 mg / ml dans de l'eau chaude, eau froide et extrait à l'éthanol (tableau 2), présentant ainsi une CMI de 1,56 mg / ml, suivie par la méthanolique et acétonique extrait 3mg / ml. Les zones d'inhibition produites par les trois solvants organiques contre Acitenobacter sp. variait entre 16.3mm et 17mm. sp Acitenobacter. est relativement moins sensible car il a survécu jusqu'à 12,5 mg / ml, ayant ainsi une CMI de 25 mg / ml. La zone d'inhibition produite par les extraits d'écorce de solvant organique contre P. mirabilis et Escherichia coli a été à peu près égale et se situait entre 14,6 mm et 16.3mm. P. mirabilis a survécu jusqu'à 12,5 mg / ml) et d'acétone (25 mg / ml (méthanol et éthanol), ayant ainsi une CMI de 25 mg / ml et 50 mg / ml, respectivement, alors que E. coli ont survécu jusqu'à 25 mg / ml (éthanol et l'acétone ) et 12,5 mg / ml (méthanol) ayant ainsi une CMI de 50 mg / ml et 25 mg / ml, respectivement. Des extraits d'écorce, à la fois organique et aqueuse, cependant, manquait une activité antibactérienne contre P. aeruginosa. Tous les résultats obtenus sont statistiquement significatifs car ils ont montré (p 0,001) en comparaison avec le contrôle. Figure 2. Zone d'inhibition antibactérienne de T. arjuna écorce extraits aqueux contre S. aureus par aqueux chaud (A), extrait aqueux froid (B), et le DMSO de contrôle négatif (C). DISCUSSION Les extraits organiques de T. arjuna feuilles possédaient une bonne activité contre les quatre agents pathogènes bactériens d'oreille à savoir Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis. sp Acitenobacter. et ne présentent aucune activité contre E. coli. Fait intéressant, l'extrait d'écorce a également montré une bonne bioactivité contre les quatre agents pathogènes bactériens d'oreille, cependant, P. aeruginosa n'a pas été trouvé sensible aux extraits d'écorce. L'activité antifongique contre C. albicans était totalement absente dans les feuilles de T. arjuna et d'écorce extraits organiques et aqueux. Dans l'étude plus tôt, avait été montré que les extraits de racine de cette plante possèdent une activité contre Aspergillus et Candida albicans Niger 27. Les feuilles aqueuses et des extraits d'écorce de T. arjuna manquait une activité antifongique contre C. albicans et une activité antibactérienne contre les bactéries testées, sauf une bactérie Gram positive, S. aureus qui a été trouvée sensible à la fois aux extraits d'écorce aqueuses chaudes et froides. Le spectre d'activité limité aux antimicrobiens dans des extraits aqueux peut être due à trois raisons: tout d'abord la polarité des composés antibactériens de les rendre plus facilement extraites par des solvants organiques, par rapport à l'extrait aqueux composé en second actif peut être présent en quantité insuffisante dans l'extrait brut à montrent une activité avec le niveau de dose employée et, troisièmement, si le principe actif est présent en grande quantité, il pourrait y avoir d'autres constituants présents dans l'extrait exerçant des effets antagonistes des composés bioactifs 43. Parmi les trois extraits organiques de feuilles criblés, l'extrait acétonique a été trouvé avoir une meilleure activité antibactérienne que les extraits éthanoliques et méthanoliques correspondants (tableau 1), en remplaçant ainsi les résultats des travailleurs antérieurs 11. 37. 44 et 45 qui ont noté que l'acétone le meilleur solvant. L'activité antibactérienne présentée par T. Arjuna feuilles et des extraits d'écorce contre les agents pathogènes de l'oreille bactérienne pourrait être due à la présence de métabolites secondaires tels que l'acide arjunique, arjungenin, arjunetin et lutéoline qui ont été signalés comme antimicrobien dans la nature 15. 16 et 23 . Cette étude révèle que les deux feuilles et l'écorce des extraits organiques de T. arjuna ont un large spectre d'activité antibactérienne contre les agents pathogènes de l'oreille comme visualisé par la formation de zones d'inhibition des deux bactéries Gram positif et Gram négatif. Fait intéressant, tous les extraits organiques de cette plante ont montré une activité beaucoup plus puissante contre les bactéries de l'oreille testés que celle de la chute norme à base de plantes de l'oreille (Bilwa tél) ayant ainsi un grand potentiel à développer comme une goutte d'oreille à base de plantes pour contrôler les infections de l'oreille bactériennes. CONCLUSIONS Nos résultats nous permettent de conclure que, tous les extraits de arjuna T. testées (dans l'un de la préparation d'acétone testé, éthanol ou méthanol) ont montré une bonne activité contre les deux agents pathogènes Gram-oreille positif négatif et Gram, l'inhibition étant plus élevé dans bactéries Gram positives que les bactéries à Gram négatif. Ceci explique sans doute l'utilisation de cette plante par les populations autochtones contre un certain nombre d'infections depuis des générations. À l'heure actuelle, peu de travail a été fait sur l'activité antimicrobienne et les applications médicinales plausibles des composés phytochimiques et investigations donc approfondies sont nécessaires telles que des études in vivo sur cette plante nécessaire pour déterminer la toxicité des constituants actifs, leurs effets secondaires, les propriétés pharmacocinétiques d'exploiter les principes bioactifs, pour une utilité thérapeutique dans le traitement des infections de l'oreille. Les activités antibactériennes peuvent être améliorées si les composants actifs sont purifiés et la posologie adéquate déterminées pour une bonne administration. Enfin, la nécessité de l'heure est le développement d'un phytocompound efficace en un produit à base de plantes exploitable, qui est dépourvue d'effets secondaires et le problème de la résistance aux médicaments. RÉFÉRENCES 1 Portes GA Examen des Otite traitement Otolaryngol Head Neck Surg. Volume 114. Numéro 4. 1996. pp. 525530 2 Roland PS. 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